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  GI基因依据软件剖析今后ORF长度是3.5kb左右，引物规划组成后Tm值在63度多一点，我具体方法是这样的：

  PCR了两次，然后跑了两次电泳(80v 40min)都没有成果，只要最前面的引物二聚体，后边就没有东西了，看看我的这些过程有没问题。下图是marker泳道和GI泳道

  谢谢楼上，我是lomand的partner，相同做这个试验，这两天预备按你所说的先加大延长时刻试试看。

  1.或许你的PCR扩增程序规划存在问题，预期扩增产品为3.5kb，可是你的扩增程序延伸时刻只要1.5分钟是不行的。一般的Taq酶的延伸功率是1000~1200bp/min，所以你能增加延伸时刻至3.5min或许4min。

  2.剖析你预期扩增产品的GC含量，如果是高GC含量片段，扩增就会很难，能够在PCR扩增系统中增加DMSO，不同的模板增加量是不同的，你能够查一些相关文献。

  3.细心核对引物，并用引物规划软件评测，使其二聚体和错配率降到最低，尽或许的防止引物自身的发夹结构。

  4.关于长链PCR产品的扩增，主张运用特别的Taq酶，比方LA-Taq，不过一般的Taq酶也能够，可是会呈现扩增失真的现象，如果是做表达方面的研讨，仍是选用Pfu好些。